在制药洁净车间中新型过氧乙酸杀芽孢剂的应用研究

洁净车间的主要功能为室内污染控制，在药品、医疗器械生产企业、医院等对污染有非常严格控制要求的领域，洁净车间发挥了至关重要的作用。如果没有洁净车间，那些对污染敏感的产品不可能批量生产，高感染风险的手术也无法实施。洁净车间一般通过高效空气过滤( HEPA)将空气中的微小颗粒物、微生物过滤掉，为室内提供“洁净”的空气，并通过维持室内外一定的压差，使室外洁净级别较低的空气无法轻易进入室内。此外，进出洁净车间的人员必须严格遵循更衣程序，以避免带入污染。尽管如此，即便是洁净等级最高的洁净车间，也依然面临微生物污染的威胁，需要有一套有效的清洁消毒方法来应对微生物问题…。制药企业在建立清洁消毒方法的时候，都会对如何选择消毒剂、如何正确使用消毒剂、如何开展相关验证存在一些疑惑。本丈通过查阅洁净车间卫生消毒相关的文献，结合国内外相关法规要求和杀芽孢剂选择原则，分析和介绍了过氧乙酸杀芽孢剂的特点和在制药洁净车间消毒应用中的优势及注意事项等。

1制药企业卫生消毒方案

制药企业所建立的卫生消毒方案中，往往需要轮流使用2种以上消毒剂，主要基于以下考虑：

  1)微生物种类多、差异大，大部分常见的消毒剂并不能对所有类型微生物都具有杀灭能力。尤其是能生成芽孢的细菌，必须用专门的杀芽孢消毒剂（亦称为高效消毒剂）才能彻底杀灭，而常规消毒剂只能部分杀灭其繁殖体，对芽孢是没有效果的：

  2)杀菌能力强的消毒剂往往使用成本相对较高，因此很多生产企业在消毒方案中采用一种相对广谱的普通消毒剂用于日常消毒（每天或每周使用一次），然后用杀芽孢剂进行定期清场（每周或每月使用一次），这样可以降低杀芽孢剂的使用成本。当然，每个生产企业的环境与工况不可能完全相同，因此具体的使用频率需要结合环境微生物监控与鉴定的结果进行分析和调整。

  3)无论是美国、欧盟、还是中国的GMP法规都要求消毒剂的种类必须多于一种，目的是降低长期使用单一消毒剂导致微生物出现耐药性的风险。尽管微生物出现耐药性的现象主要是针对抗生素而言，迄今并没有有力的证据表明微生物对消毒剂也会产生“耐药性”，但作为CMP法规的强制性规定，企业是必须遵循的

2消毒剂的类型

  不同类型的消毒剂其杀菌机理、杀菌谱、功效强弱都有差异。有些消毒剂只是起到抑制细菌生长的作用；有些消毒剂能够破坏细菌的细胞结构，从而起到杀灭作用；而有些消毒剂不仅能够破坏细胞结构，还能灭活细菌芽孢。芽孢是洁净车间内最难以去除的微生物威胁：芽孢致密的多肽外壳便其对消毒剂具有极强的抗性，常见的亲水性消毒成分很难渗入芽孢内部发挥作用。芽孢生命力极强，在洁净车间内干燥、缺乏营养的环境中仍然能长期存活，一旦条件适宜，芽孢就能重新变成细菌繁殖体，给环境、产品造成污染：但需要强调的是，界定“消毒剂”并不需要把能否杀灭芽孢作为标准，因为这是更高的要求。一款产品只要能证明对细菌、真菌或病毒等达到一定的杀灭程度，就可以被认定为消毒剂

 洁净车间常用的消毒剂分为两大类：一类是非氧化型消毒剂，以醇类、季铵盐类为代表；另一类是氧化型消毒剂，如过氧乙酸、二氧化氯、次氯酸盐等。非氧化型消毒剂一般不具备杀灭芽孢的能力，而氧化型消毒剂中有不少杀芽孢剂。

3杀芽孢剂的选择原则

  杀芽孢剂在杀菌能力方面无疑是最强效的，但它们也可能会给人员健康、使用安全带来更多负面影响，因此必须谨慎选择。以下列举了为洁净车间选择杀芽孢剂时通常需要考虑的方面：

  1)杀菌接触时间越短越好，最好不要超过10min。接触时间是指杀芽孢剂必须保留在消毒表面上的时间，即消毒后至恢复生产前的等待时间。

  2)有些杀芽孢剂对使用温度、pH值的范同有要求，如果超过了会影响其杀菌功效    3) GMP法规[2-4]规定周于A、B级洁净车间内的消毒剂必须是无菌的。如果杀芽孢剂的成分在经过伽马射线辐照或除菌过滤后杀菌功效降低较多的，不宜用于A/B级洁净车间。

  4)有些企业在消毒前会先用清洁剂做清洁，由于清洁剂可能会影响到后续消毒剂的杀菌功效，因此需要考察杀芽孢剂与所用的清洁剂之间的相容性。

  5)尽管没有绝对安全的消毒剂，我们还是应该尽量选择那些对人员、环境相对更安全的产品。

  6)必须重视杀芽孢剂与洁净车间内各种表面材质的相容性，避免出现材质腐蚀、变色的情况。例如，含氯的杀芽孢剂对不锈钢等材质的影响比较明显，会造成变色、腐蚀等。如果选择此类型的杀芽孢剂，在消毒后注意用无菌的水或醇将表面的杀芽孢剂残留擦拭干净。

  7)由于要穿着防护严密的洁净服，人员在洁净车间内进行消毒并不是一件轻松的工作，因此杀芽孢剂产品的易用性也是需要考虑的因素？有些杀芽孢剂使用前需要将两种组分先混合，混合液一般有效期比较短，不能继续储存，使用起来并不方便。比较理想的方式是同一种杀芽孢剂既有浓缩型（能够根据需要稀释后用于大面积的表面擦拭消毒），又有即用型（配有喷头，直接对小面积表面进行喷洒消毒）。

  8)市售的消毒剂产品如果宣称能杀芽孢的，供应商应该能侈提供测试报告，以证明其对芽孢的杀灭对数值达到官方认可的标准。

4过氧乙酸杀芽孢剂在制药洁净车间消毒中的应用

  制药企业对洁净车间内出现芽孢污染都是非常重视的，也是微生物监控的重点。传统的控制手段是通过甲醛熏蒸、臭氧消毒等空间灭菌的方式来处理，现在也有一些更环保的新技术如过氧化氢蒸气灭菌可以杀灭沽净室内的芽孢。但空间熏蒸的方式毕竟是一剂“猛药”，杀菌的同时也会带来环保、安全与材质腐蚀等问题，并不适于高频使用。现在越来越多的制药企业开始重视通过日常使用杀芽孢剂来降低环境中出现芽孢的几率，从而减少对于空间灭菌方式的依赖。常见的杀芽孢剂有次氯酸盐（如84消毒液）、二氧化氯、高浓度的双氧水、过氧乙酸等。其中过氧乙酸在欧洲是杀芽孢剂应用的主流趋势，它能快速杀灭各种类型的微生物。此外，过氧乙酸杀芽孢剂安全性好、无残留，很适合洁净车间的环境要求。

4.1过氧乙酸杀芽孢剂的特点

  过氧乙酸属于氧化性消毒剂，与传统的氧化性消毒剂次氯酸盐、二氧化氯等含氯杀芽孢剂相比，过氧乙酸是一种新型的杀芽孢剂。过氧乙酸由过氧化氢与醋酸反应生成，其溶液中一般都含有过氧乙酸、过氧化氢和醋酸，其中过氧乙酸是主要的杀菌活性成分㈣，它通过氧化微生物外层细胞膜使微生物快速失去活性，过氧乙酸能够渗透芽孢的多肽外壳破坏芽孢内部的大分子如糖类、核酸、脂质等，最终造成细胞裂解和死亡。市售的过氧乙酸杀芽孢剂产品中过氧乙酸含量一般为5 %—15%。

  过氧乙酸消毒剂非常适合洁净车间的使用环境，主要体现在：

  1)在洁净车间内室温或低温条件下，过氧乙酸消毒液的活性不会降低。

  2)过氧己酸消毒液与洁净车间内常见材质的相容性好，对不锈钢不会造成腐蚀。

  3)过氧乙酸的杀菌活性不仅不受有机物的影响，而且能有效去除表面的有机物残留。

  4)过氧乙酸消毒液使用安全性好，人员在配制时不需要采取特殊的防护措施，常规穿戴即可。

  5)过氧乙酸消毒液既有浓缩型产品供稀释用于大面积表面消毒，也有稳定的即用型产品用于小面积表面消毒。

  6)过氧乙酸可分解挥发，消毒后表面无残留。分解产物为水、氧气和二氧化碳，没有有害的分解产物。

  与含氯杀芽孢剂相比较，过氧乙酸杀芽孢剂在材质相容性、残留、稳定性和人员安全性方面均有明显优势，更适合洁净车间环境使用。

4.2过氧乙酸杀芽孢剂在使用中的注意事项

  1)过氧乙酸消毒剂其主要活性成分过氧乙酸、过氧化氢都存在分解的趋势。为了尽可能延长过氧乙酸消毒剂的保质期与使用期，制造商都会有自己关键的稳定技术。尽管使用者很难知道稳定技术的细节，但可以通过产品所宣称的保质期了解其稳定性优劣。例如两种过氧乙酸杀芽孢剂，其活性成分浓度相当，其中一种的保质期为12个月，另外一种为18～24个月，那么显然保质期长的产品在使用中稳定性会更好一些。此外，有些企业在采购过氧乙酸消毒剂后，会通过企业自裣建立内控指标，自检时往往出现过氧乙酸、过氧化氢的含量低于制造商所提供的出厂检验值，这也是由于成分的分解导致的，稳定技术只能延缓分解的速率。一般制造商都会提供一个最低有效浓度值，企业自检只要能高于最低有效浓度值，那么该产品仍在有效期之内。

  2)过氧乙酸消毒液的pH值很低，使用时应该避免接触铁、锌、铜等软性金属，铝材虽然耐受性要好一些，但也不宜长时间接触。

  3)过氧乙酸消毒液分解产物之一为醋酸，有刺激性气味，在洁净车间相对密闭的空间内大量使用时可能会刺激使用人员的呼吸道，因此使用人员除了要戴口罩做好自身防护之外，最好能合理安排消毒区域，减少连续作业的时间。

  4)过氧乙酸消毒剂能够快速杀灭芽孢，但是对霉菌的杀灭效果相对要弱一些，往往需要提高使用浓度或延长接触时间才能杀灭霉菌。

4.3过氧乙酸杀芽孢剂的相关验证

  消毒剂相关的验证包括杀菌效力验证与清洁验证（残留考察）。杀菌效力验证一般包含实验室杀菌效力测试（悬液法或载体法）、现场考察、日常监控”踟。实验室杀菌测试最好选择载体喷雾杀菌实验，一方面可以用洁净车间内不同的材质做成载体，考察材质对杀菌效力的影响；另一方面载体喷雾法比悬液法或载体浸泡法更右挑战性，也更贴近于实际使用的情况。我国出版的《消毒技术规范》，《无菌制剂CMP实施指南》中都能找到相关的实验方法。

  国外普遍认为过氧乙酸杀芽孢剂是无残留的，但国内制药企业对此比较谨慎。要考察残留，最关键的是建立一种检测限足够低、操作性强的过氧乙酸／过氧化氢残留检测方法。目前有一些商用检测测试条最低能检测出0.5 ppm的过氧乙酸／过氧化氢，而且操作性比使用HPLC、GC-MS等仪器分析手段要简单方便得多，比较符合制药企业残留检测的要求。

5小结

  消毒剂对于洁净车间的微生物污染控制而言是非常重要的，但如何选择和使用好消毒剂并不是简单的事情。定期使用杀芽孢剂是洁净车间消毒计划中一项关键原则。由于过氧乙酸杀芽孢剂具有操作方便、安全性好、无残留、材质相容性好、杀菌效果显著等优点，非常适合制药洁净车间的消毒使用。